हमनी के पहिले रिपोर्ट कईले रहनी जा कि लिवर फाइब्रोसिस के मरीज में आंत से निकलल ट्रिप्टोफैन मेटाबोलाइट इंडोल-3-प्रोपिओनिक एसिड (IPA) के सीरम लेवल कम होखेला। एह अध्ययन में हमनी के सीरम आईपीए के स्तर के संबंध में मोटापा से पीड़ित लिवर में ट्रांसक्रिप्टोम अवुरी डीएनए मिथाइलोम के जांच कईनी, संगही इन विट्रो में हेपेटिक स्टेलेट सेल (एचएससी) के फेनोटाइपिक निष्क्रियता के पैदा करे में आईपीए के भूमिका के जांच कईनी।
एह अध्ययन में टाइप 2 डायबिटीज मेलिटस (T2DM) (उम्र 46.8 ± 9.3 साल; बीएमआई: 42.7 ± 5.0 किलोग्राम/मीटर2) के बिना 116 मोटापा से पीड़ित मरीज के शामिल कईल गईल, जिनकर कुओपियो बेरियाट्रिक सर्जरी सेंटर (KOBS) में बेरियाट्रिक सर्जरी भईल रहे। परिसंचारी आईपीए के स्तर के माप लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS) द्वारा कइल गइल, लिवर ट्रांसक्रिप्टोम विश्लेषण कुल आरएनए अनुक्रमण द्वारा कइल गइल, आ डीएनए मिथाइलेशन विश्लेषण इनफिनियम ह्यूमनमिथाइलेशन450 बीडचिप के इस्तेमाल से कइल गइल। इन विट्रो प्रयोग खातिर मानव यकृत तारकीय कोशिका (LX-2) के इस्तेमाल कइल गइल।
सीरम आईपीए के स्तर लिवर में एपोप्टोटिक, माइटोफेजिक अवुरी लंबा उमिर के रास्ता में शामिल जीन के अभिव्यक्ति के संगे सहसंबंधित रहे। एकेटी सेरीन/थ्रेओनिन किनेज 1 (AKT1) जीन लिवर ट्रांसक्रिप्ट आ डीएनए मिथाइलेशन प्रोफाइल में सभसे ढेर आ प्रमुख इंटरैक्टिंग जीन रहल। आईपीए उपचार से एपोप्टोसिस पैदा भइल, माइटोकॉन्ड्रिया के श्वसन में कमी आइल आ एलएक्स-2 कोशिका सभ के फाइब्रोसिस, एपोप्टोसिस आ जीवित रहे के नियंत्रित करे खातिर जानल जाए वाला जीन सभ के एक्सप्रेशन के मॉड्यूलेट क के कोशिका के आकृति बिज्ञान आ माइटोकॉन्ड्रिया डायनामिक्स में बदलाव भइल।
एकरा के मिला के देखल जाय तब ई डेटा एह बात के समर्थन करे ला कि आईपीए के संभावित चिकित्सीय परभाव होला आ एपोप्टोसिस के पैदा क सके ला आ एचएससी फेनोटाइप के निष्क्रिय अवस्था के ओर शिफ्ट क सके ला, जेकरा से एचएससी सक्रियण आ माइटोकॉन्ड्रिया मेटाबोलिज्म में हस्तक्षेप क के लिवर फाइब्रोसिस के रोके के संभावना के बिस्तार हो सके ला।
मोटापा आ मेटाबोलिक सिंड्रोम के प्रचलन के मेटाबोलिक रूप से जुड़ल फैटी लिवर डिजीज (MASLD) के बढ़ती के घटना से जोड़ल गइल बा; ई बेमारी आम आबादी के 25% से 30% लोग के प्रभावित करे ले [1] । MASLD एटियलजि के मुख्य परिणाम लिवर फाइब्रोसिस होला, ई एगो गतिशील प्रक्रिया हवे जेकर बिसेसता फाइब्रोस एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स (ECM) के लगातार जमा होखे के होला [2] । लिवर फाइब्रोसिस में शामिल मुख्य कोशिका सभ हेपेटिक स्टेलेट कोशिका (HSC) होलीं, जवन चार गो ज्ञात फेनोटाइप सभ के परदरशन करे लीं: शांत, सक्रिय, निष्क्रिय आ बुढ़ापा [3, 4]। एचएससी सभ के सक्रिय कइल जा सके ला आ शांत रूप से ट्रांसडिफरेंसेशन हो सके ला आ ऊर्जा के ढेर मांग वाला प्रोलिफेरेटिव फाइब्रोब्लास्ट नियर कोशिका सभ में बदलल जा सके ला, α-स्मूद मसल एक्टिन (α-SMA) आ टाइप I कोलेजन (Col-I) के एक्सप्रेशन बढ़ जाला [5, 6]। लिवर फाइब्रोसिस रिवर्सल के दौरान, सक्रिय एचएससी सभ के एपोप्टोसिस भा निष्क्रियता के माध्यम से खतम कइल जाला। एह प्रक्रिया सभ में फाइब्रोजेनिक जीन सभ के डाउनरेगुलेशन आ प्रोसर्वाइवल जीन सभ के मॉड्यूलेशन (जइसे कि NF-κB आ PI3K/Akt सिग्नलिंग पथ) [7, 8] के साथे-साथ माइटोकॉन्ड्रिया के डायनामिक्स आ कामकाज में बदलाव भी सामिल बा [9] ।
आंत में पैदा होखे वाला ट्रिप्टोफैन मेटाबोलाइट इंडोल-3-प्रोपिओनिक एसिड (IPA) के सीरम लेवल में कमी पावल गइल बा जेह में MASLD समेत मानव मेटाबोलिक बेमारी सभ में कमी पावल गइल बा [10–13]। आईपीए आहार में फाइबर के सेवन से जुड़ल होला, एकरा के एंटीऑक्सीडेंट आ एंटी-इंफ्लेमेटरी परभाव खातिर जानल जाला आ इन विवो आ इन विट्रो में आहार से पैदा होखे वाला गैर-मद्यपान स्टीटोहेपेटाइटिस (NASH) फेनोटाइप के कमजोर क देला [11-14]। कुछ सबूत हमनी के पिछला अध्ययन से मिलल बा, जवना में पता चलल बा कि कुओपियो बेरियाट्रिक सर्जरी स्टडी (KOBS) में लिवर फाइब्रोसिस के मरीज में सीरम आईपीए के स्तर कम रहे, जबकि लिवर फाइब्रोसिस के बिना मोटापा से पीड़ित मरीज में कम रहे। एकरे अलावा, हमनी के ई देखवनी जा कि आईपीए उपचार से अइसन जीन सभ के एक्सप्रेशन कम हो सके ला जे मानव हेपेटिक स्टेलेट सेल (LX-2) मॉडल में कोशिका के आसंजन, कोशिका प्रवासन आ हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल सक्रियण के शास्त्रीय मार्कर होलें आ ई एगो संभावित हेपेटोप्रोटेक्टिव मेटाबोलाइट हवें [15] । हालाँकि, ई साफ नइखे कि आईपीए एचएससी एपोप्टोसिस आ माइटोकॉन्ड्रिया बायोएनर्जेटिक्स के सक्रिय क के लिवर फाइब्रोसिस रिग्रेशन के कइसे पैदा करे ला।
इहाँ, हमनी के इ देखावत बानी जा कि सीरम आईपीए मोटापा से ग्रस्त लेकिन गैर-टाइप 2 डायबिटीज (KOBS) के व्यक्ति के लिवर में एपोप्टोसिस, माइटोफेजी अवुरी लंबा उम्र के रास्ता से समृद्ध जीन के अभिव्यक्ति से जुड़ल बा। एकरा अलावे हमनी के पाता चलल कि आईपीए निष्क्रियता मार्ग के माध्यम से सक्रिय हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) के निकासी अवुरी गिरावट के प्रेरित क सकता। ई परिणाम आईपीए खातिर एगो नया भूमिका के खुलासा करे लें, जेकरा चलते ई लिवर फाइब्रोसिस रिग्रेशन के बढ़ावा देवे खातिर एगो संभावित चिकित्सीय लक्ष्य बन गइल बा।
KOBS कोहोर्ट में भइल एगो पिछला अध्ययन में पता चलल कि लिवर फाइब्रोसिस के मरीजन में बिना लिवर फाइब्रोसिस के मरीजन के तुलना में सर्कुलेशन आईपीए के स्तर कम रहे [15] । टाइप 2 डायबिटीज के संभावित भ्रमित करे वाला प्रभाव के बाहर करे खातिर, हमनी के अध्ययन के आबादी के रूप में चल रहल KOBS अध्ययन से बिना टाइप 2 डायबिटीज (औसत उम्र ± SD: 46.8 ± 9.3 साल; बीएमआई: 42.7 ± 5.0 किलोग्राम / वर्ग मीटर) (तालिका 1) के 116 मोटापा से ग्रस्त मरीज के भर्ती कईनी। सभ प्रतिभागी लिखित रूप से सूचित सहमति देले अवुरी अध्ययन प्रोटोकॉल के हेलसिंकी के घोषणापत्र (54/2005, 104/2008 अवुरी 27/2010) के मुताबिक नॉर्थ सावो काउंटी अस्पताल के नैतिकता समिति से मंजूरी दिहल गईल।
बेरियाट्रिक सर्जरी के दौरान लिवर बायोप्सी के नमूना लिहल गइल आ अनुभवी पैथोलॉजिस्ट लोग द्वारा पहिले बतावल पैमाना के अनुसार हिस्टोलॉजिकल आकलन कइल गइल [17, 18]। आकलन के पैमाना सभ के संछेप में पूरक तालिका S1 में दिहल गइल बा आ एकर वर्णन पहिले भी कइल गइल बा [19] ।
उपवास सीरम नमूना के मेटाबोलोमिक्स विश्लेषण (n = 116) खातिर अनलक्षित तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) द्वारा विश्लेषण कइल गइल। नमूना के विश्लेषण UHPLC-qTOF-MS सिस्टम (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Germany) के उपयोग से कइल गइल जइसन कि पहिले बतावल गइल बा19। आइसोप्रोपाइल अल्कोहल (IPA) के पहचान रिटेन टाइम आ शुद्ध मानक के साथ एमएस/एमएस स्पेक्ट्रम के तुलना के आधार पर कइल गइल। आगे के सभ बिस्लेषण सभ में आईपीए सिग्नल तीव्रता (पीक एरिया) पर बिचार कइल गइल [20] ।
पूरा लिवर के आरएनए अनुक्रमण इलुमिना HiSeq 2500 के इस्तेमाल से कइल गइल आ डेटा के पहिले बतावल तरीका से प्रीप्रोसेस कइल गइल [19, 21, 22]। हमनी के माइटोमाइनर 4.0 डेटाबेस से चुनल 1957 जीन के इस्तेमाल से माइटोकॉन्ड्रिया फंक्शन / बायोजेनेसिस के प्रभावित करे वाला ट्रांसक्रिप्ट के लक्षित अंतर अभिव्यक्ति विश्लेषण कईनी [ 23 ]। लिवर डीएनए मिथाइलेशन बिस्लेषण इनफिनियम ह्यूमनमिथाइलेशन450 बीडचिप (इलुमिना, सैन डिएगो, सीए, अमेरिका) के इस्तेमाल से कइल गइल जेह में पहिले बतावल तरीका के इस्तेमाल कइल गइल [24, 25]।
मानव यकृत स्टेलेट कोशिका (LX-2) के प्रो स्टीफनो रोमियो द्वारा दयालुता से उपलब्ध करावल गइल आ डीएमईएम/एफ12 माध्यम (बायोवेस्ट, L0093-500, 1% पेन/स्ट्रेप; लोन्जा, DE17-602E, 2% FBS; गिबको, 10270-106) में संवर्धित आ रखरखाव कइल गइल। आईपीए के कामकाजी खुराक के चयन करे खातिर, एलएक्स-2 कोशिका सभ के डीएमईएम/एफ12 माध्यम में 24 घंटा ले आईपीए के अलग-अलग एकाग्रता (10 μM, 100 μM आ 1 mM; सिग्मा, 220027) के साथ उपचार कइल गइल। एकरे अलावा, एचएससी सभ के निष्क्रिय करे के आईपीए के क्षमता के जांच करे खातिर, एलएक्स-2 कोशिका सभ के 5 एनजी/एमएल टीजीएफ-β1 (आर एंड डी सिस्टम, 240-बी-002/सीएफ) आ 1 ​​एमएम आईपीए के साथ सीरम-फ्री मीडियम में 24 घंटा ले सह-उपचार कइल गइल। संबंधित वाहन नियंत्रण खातिर, TGF-β1 उपचार खातिर 0.1% BSA वाला 4 nM HCL आ IPA उपचार खातिर 0.05% DMSO के इस्तेमाल कइल गइल, आ संयोजन उपचार खातिर दुनों के एक साथ इस्तेमाल कइल गइल।
एपोप्टोसिस के आकलन निर्माता के निर्देश के अनुसार 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, USA, Cat# 640922) के साथ FITC Annexin V एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट के इस्तेमाल से कइल गइल। संक्षेप में, LX-2 (1 × 105 कोशिका/वेल) के 12-वेल प्लेट में रात भर संवर्धित कइल गइल आ फिर आईपीए या आईपीए आ टीजीएफ-β1 के कई खुराक से उपचार कइल गइल। अगिला दिने, फ्लोटिंग आ एडहेरेंट कोशिका सभ के एकट्ठा कइल गइल, ट्राइप्सिनाइज कइल गइल, पीबीएस से धो के एनेक्सिन वी बाइंडिंग बफर में फिर से लटका दिहल गइल आ एफआईटीसी-एनेक्सिन वी आ 7-एएडी के साथ 15 मिनट ले इन्क्यूबेट कइल गइल।
जीवित कोशिका में माइटोकॉन्ड्रिया के माइटोट्रैकर TM रेड CMXRos (MTR) (थर्मो फिशर साइंटिफिक, कार्लस्बैड, सीए) के उपयोग से ऑक्सीडेटिव गतिविधि खातिर रंगल गइल। एमटीआर परख खातिर, एलएक्स-2 कोशिका के आईपीए आ टीजीएफ-β1 के साथ बराबर घनत्व पर इनक्यूबेट कइल गइल। 24 घंटा के बाद, जिंदा कोशिका सभ के ट्राइप्सिनाइज कइल गइल, पीबीएस से धोवल गइल आ फिर 100 μM MTR के साथ सीरम-फ्री मीडियम में 37 °C पर 20 मिनट ले इनक्यूबेट कइल गइल जइसन कि पहिले बतावल गइल बा [26] । जीवित कोशिका आकृति विज्ञान विश्लेषण खातिर, कोशिका आकार आ साइटोप्लाज्मिक जटिलता के विश्लेषण क्रमशः आगे बिखरल (FSC) आ साइड बिखर (SSC) पैरामीटर के इस्तेमाल से कइल गइल।
सभ डेटा (30,000 घटना) के नोवोसाइट क्वांटियन (एजिलेंट) के इस्तेमाल से हासिल कइल गइल आ नोवोएक्सप्रेस® 1.4.1 भा फ्लोजो वी.10 सॉफ्टवेयर के इस्तेमाल से बिस्लेषण कइल गइल।
ऑक्सीजन खपत दर (OCR) आ बाह्य कोशिका अम्लीकरण दर (ECAR) के रियल टाइम में नापल गइल, निर्माता के निर्देश के अनुसार सीहॉर्स एक्सएफ सेल माइटो तनाव से लैस सीहॉर्स एक्सट्रासेलुलर फ्लक्स एनालाइजर (एजिलेंट टेक्नोलॉजीज, सांता क्लारा, सीए) के इस्तेमाल से। संक्षेप में, 2 × 104 LX-2 कोशिका / कुएं के XF96 कोशिका संस्कृति प्लेट पर बीज लगावल गइल। रात भर ऊष्मायन के बाद, कोशिका के आइसोप्रोपानोल (IPA) आ TGF-β1 (पूरक विधि 1) के साथ उपचार कइल गइल। डेटा के विश्लेषण सीहॉर्स एक्सएफ वेव सॉफ्टवेयर के इस्तेमाल से कइल गइल, जवना में सीहॉर्स एक्सएफ सेल एनर्जी फेनोटाइप टेस्ट रिपोर्ट जनरेटर शामिल बा। एकरा से बायोएनर्जेटिक हेल्थ इंडेक्स (BHI) के गणना कइल गइल [27] ।
कुल आरएनए के सीडीएनए में ट्रांसक्रिप्ट कइल गइल। बिसेस तरीका सभ खातिर संदर्भ [15] देखल जाय। मानव 60S राइबोसोमल एसिडिक प्रोटीन पी 0 (RPLP0) आ साइक्लोफिलिन ए 1 (PPIA) mRNA के स्तर के संरचनात्मक जीन नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल कइल गइल। क्वांटस्टूडियो 6 प्रो रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम (थर्मो फिशर, लैंडस्मीर, नीदरलैंड) के इस्तेमाल TaqManTM फास्ट एडवांस्ड मास्टर मिक्स किट (एप्लाइड बायोसिस्टम्स) भा सेंसिफास्ट SYBR Lo-ROX किट (बायोलाइन, बायो 94050) के साथ कइल गइल, आ सापेक्षिक जीन एक्सप्रेशन फोल्ड के गणना तुलनात्मक Ct मान साइकिलिंग पैरामीटर (ΔΔCt) आ के इस्तेमाल से कइल गइल ∆∆Ct विधि के बा। प्राइमर के विवरण पूरक तालिका S2 आ S3 में दिहल गइल बा।
न्यूक्लियर डीएनए (ncDNA) आ माइटोकॉन्ड्रिया डीएनए (mtDNA) के निकालल गइल DNeasy ब्लड एंड टिश्यू किट (Qiagen) के इस्तेमाल से जइसन कि पहिले बतावल गइल बा [28] । mtDNA के सापेक्षिक मात्रा के गणना हर लक्ष्य mtDNA क्षेत्र के तीनों न्यूक्लियर डीएनए क्षेत्र (mtDNA/ncDNA) के ज्यामितीय औसत के अनुपात के गणना करके कइल गइल, जइसन कि पूरक तरीका 2 में बिस्तार से बतावल गइल बा।mtDNA आ ncDNA खातिर प्राइमर सभ के बिस्तार पूरक तालिका S4 में दिहल गइल बा।
जीवित कोशिका सभ के माइटोट्रैकर TM रेड CMXRos (MTR) (थर्मो फिशर साइंटिफिक, कार्लस्बैड, सीए) से रंगाई कइल गइल ताकि इंटरसेलुलर आ इंट्रासेलुलर माइटोकॉन्ड्रिया नेटवर्क के बिजुअलाइज कइल जा सके। LX-2 कोशिका (1 × 104 कोशिका / कुएं) के संबंधित कांच-तल वाला संस्कृति प्लेट (Ibidi GmbH, Martinsried, जर्मनी) में ग्लास स्लाइड पर संवर्धित कइल गइल। 24 घंटा के बाद, जिंदा LX-2 कोशिका सभ के 100 μM MTR के साथ 37 °C पर 20 मिनट ले इन्क्यूबेट कइल गइल आ कोशिका नाभिक सभ के DAPI (1 μg/ml, सिग्मा-एल्ड्रिच) से रंगाई कइल गइल जइसन कि पहिले बतावल गइल बा [29] । माइटोकॉन्ड्रिया नेटवर्क सभ के बिजुअलाइजेशन जेइस एक्सियो ऑब्जर्वर इनवर्ट माइक्रोस्कोप (कार्ल जेइस माइक्रोइमेजिंग जीएमबीएच, जेना, जर्मनी) के इस्तेमाल से कइल गइल जे 63×NA 1.3 ऑब्जेक्टिव के इस्तेमाल से 5% CO2 के साथ आर्द्र वातावरण में 37 °C पर जेइस एलएसएम 800 कॉनफोकल मॉड्यूल से लैस कइल गइल। हमनी के हर नमूना प्रकार खातिर दस जेड-सीरीज इमेज हासिल कईनी। हर जेड-सीरीज में 30 गो खंड होलें, हर खंड के मोटाई 9.86 माइक्रोन होला। हर नमूना खातिर, दस गो अलग-अलग फील्ड ऑफ व्यू के इमेज जेन 2009 सॉफ्टवेयर (Carl Zeiss Microimaging GmbH, जेना, जर्मनी) के इस्तेमाल से हासिल कइल गइल आ पूरक तरीका 3 में बिस्तार से बतावल पैरामीटर सभ के अनुसार ImageJ सॉफ्टवेयर (v1.54d) [30, 31] के इस्तेमाल से माइटोकॉन्ड्रिया आकृति बिज्ञान के बिस्लेषण कइल गइल।
कोशिका सभ के 0.1 एम फॉस्फेट बफर में 2% ग्लूटारएलडीहाइड से फिक्स कइल गइल, एकरे बाद 1% ऑस्मियम टेट्रोक्साइड घोल (सिग्मा एल्ड्रिच, एमओ, अमेरिका) से फिक्सेशन कइल गइल, धीरे-धीरे एसीटोन (मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) से निर्जलीकरण कइल गइल, आ अंत में इपोक्सी राल में एम्बेड कइल गइल। अल्ट्राथिन खंड तइयार कइल गइल आ 1% यूरेनाइल एसीटेट (मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) आ 1% सीसा साइट्रेट (मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) से रंगाई कइल गइल। अल्ट्रास्ट्रक्चरल इमेज जेईएम 2100एफ एक्सआईआई ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (जेओएल लिमिटेड, टोक्यो, जापान) के इस्तेमाल से 80 केवी के एक्सेलरेटिंग वोल्टेज पर लिहल गइल।
24 घंटा तक आईपीए से उपचारित LX-2 कोशिका के आकृति विज्ञान के विश्लेषण 50x आवर्धन पर फेज-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी द्वारा जेइस उल्टा प्रकाश माइक्रोस्कोप (Zeiss Axio Vert.A1 आ AxioCam MRm, जेना, जर्मनी) के उपयोग से कइल गइल।
नैदानिक ​​डेटा के औसत ± मानक विचलन या माध्य (इंटरक्वार्टाइल रेंज: आईक्यूआर) के रूप में व्यक्त कइल गइल। तीनों अध्ययन समूहन के बीच अंतर के तुलना करे खातिर विचरण (निरंतर चर) भा χ2 परीक्षण (श्रेणीगत चर) के एकतरफा विश्लेषण के इस्तेमाल कइल गइल। कई गो परीक्षण खातिर सही करे खातिर झूठा पॉजिटिव दर (FDR) के इस्तेमाल कइल गइल, आ FDR < 0.05 वाला जीन सभ के सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मानल गइल। स्पीयरमैन सहसंबंध विश्लेषण के इस्तेमाल आईपीए सिग्नल तीव्रता के साथ सीपीजी डीएनए मिथाइलेशन के सहसंबंधित करे खातिर कइल गइल, जवना में नाममात्र के पी मान (पी <0.05) के रिपोर्ट कइल गइल।
पथ विश्लेषण 268 ट्रांसक्रिप्ट (नाममात्र पी <0.01), 119 माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल ट्रांसक्रिप्ट (नाममात्र के पी <0.05), आ 3093 लिवर ट्रांसक्रिप्ट में से 4350 सीपीजी सभ खातिर वेब आधारित जीन सेट एनालिसिस टूल (WebGestalt) के इस्तेमाल से कइल गइल जे परिसंचारी सीरम आईपीए लेवल से जुड़ल रहलें। मुक्त रूप से उपलब्ध वेनी डीबी (संस्करण 2.1.0) टूल के इस्तेमाल ओवरलैपिंग जीन सभ के खोज करे खातिर कइल गइल आ प्रोटीन-प्रोटीन के परस्पर क्रिया के बिजुअलाइज करे खातिर स्ट्रिंगडीबी (संस्करण 11.5) के इस्तेमाल कइल गइल।
एलएक्स-2 प्रयोग खातिर नमूना सभ के सामान्यता के परीक्षण डी'अगोस्टिनो-पियर्सन परीक्षण के इस्तेमाल से कइल गइल। कम से कम तीन गो जैविक प्रतिकृति से डेटा लिहल गइल आ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के साथ एकतरफा एनोवा कइल गइल। 0.05 से कम पी-वैल्यू के सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मानल गइल। डेटा औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा, आ हर आकृति में प्रयोग के संख्या देखावल गइल बा। सभ विश्लेषण आ ग्राफ विंडोज खातिर ग्राफपैड प्रिज्म 8 सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर इंक, संस्करण 8.4.3, सैन डिएगो, अमेरिका) के इस्तेमाल से कइल गइल।
सबसे पहिले हमनी के सीरम आईपीए के स्तर के लिवर, पूरा शरीर अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया ट्रांसक्रिप्ट के संगे संबंध के जांच कईनी। कुल ट्रांसक्रिप्ट प्रोफाइल में, सीरम आईपीए के स्तर से जुड़ल सभसे मजबूत जीन MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; माइटोजन-सक्रिय प्रोटीन किनेज-सक्रिय प्रोटीन किनेज 3) रहल; माइटोकॉन्ड्रिया से संबंधित ट्रांसक्रिप्ट प्रोफाइल में, सभसे मजबूत संबद्ध जीन AKT1 (FDR = 0.7621; AKT सेरिन/थ्रेओनिन किनेज 1) (अतिरिक्त फाइल 1 आ अतिरिक्त फाइल 2) रहल।
एकरा बाद हमनी के वैश्विक ट्रांसक्रिप्ट (n = 268; p <0.01) अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल ट्रांसक्रिप्ट (n = 119; p <0.05) के विश्लेषण कईनी, अंत में एपोप्टोसिस के सबसे महत्वपूर्ण कैनोनिकल मार्ग (p = 0.0089) के रूप में पहचान कईनी। सीरम आईपीए स्तर से जुड़ल माइटोकॉन्ड्रिया ट्रांसक्रिप्ट खातिर, हमनी के एपोप्टोसिस (FDR = 0.00001), माइटोफेजी (FDR = 0.00029), अवुरी TNF सिग्नलिंग मार्ग (FDR = 0.000006) (चित्र 1 ए, तालिका 2, अवुरी पूरक चित्र 1A-B) प ध्यान केंद्रित कईनी।
सीरम आईपीए के स्तर के संगे मानव लिवर में ग्लोबल, माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल ट्रांसक्रिप्ट, आ डीएनए मिथाइलेशन के ओवरलैपिंग विश्लेषण। ए 268 ग्लोबल ट्रांसक्रिप्ट, 119 माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल ट्रांसक्रिप्ट, आ डीएनए मिथाइल ट्रांसक्रिप्ट सभ के प्रतिनिधित्व करे ला जे सीरम आईपीए लेवल से जुड़ल 3092 सीपीजी साइट सभ पर मैप कइल गइल बाड़ें (ग्लोबल ट्रांसक्रिप्ट आ डीएनए मिथाइलेटेड खातिर p मान < 0.01, आ माइटोकॉन्ड्रिया ट्रांसक्रिप्ट सभ खातिर p मान < 0.05)। प्रमुख ओवरलैपिंग ट्रांसक्रिप्ट सभ के बीच में देखावल गइल बा (AKT1 आ YKT6)। B अन्य जीन सभ के साथ सभसे ढेर इंटरैक्शन स्कोर (0.900) वाला 13 गो जीन सभ के इंटरैक्शन मैप के निर्माण 56 ओवरलैपिंग जीन (ब्लैक लाइन क्षेत्र) से कइल गइल जे ऑनलाइन टूल स्ट्रिंगडीबी के इस्तेमाल से सीरम आईपीए लेवल से काफी जुड़ल रहलें। हरियर: जीन ऑन्टोलॉजी (जीओ) सेलुलर घटक: माइटोकॉन्ड्रिया (जीओ:0005739) के मैप कइल गइल जीन। AKT1 डेटा (टेक्स्ट माइनिंग, प्रयोग, डेटाबेस, आ को-एक्सप्रेशन के आधार पर) के आधार पर अन्य प्रोटीन सभ के साथ बातचीत खातिर सभसे ढेर स्कोर (0.900) वाला प्रोटीन हवे। नेटवर्क नोड प्रोटीन सभ के प्रतिनिधित्व करे लें आ किनारे प्रोटीन सभ के बीच के कनेक्शन के प्रतिनिधित्व करे लें।
चूँकि आंत के माइक्रोबायोटा मेटाबोलाइट्स डीएनए मिथाइलेशन के माध्यम से एपिजेनेटिक संरचना के नियंत्रित क सके लें [32] , हमनी के जांच कइनी जा कि सीरम आईपीए के स्तर लिवर के डीएनए मिथाइलेशन से जुड़ल बा कि ना। हमनी के पाता चलल कि सीरम आईपीए के स्तर से जुड़ल दुगो प्रमुख मिथाइलेशन साइट प्रोलाइन-सेरीन-समृद्ध क्षेत्र 3 (C19orf55) अवुरी हीट शॉक प्रोटीन परिवार बी (छोट) सदस्य 6 (HSPB6) (अतिरिक्त फाइल 3) के नजदीक रहे। 4350 CpG (पी <0.01) के डीएनए मिथाइलेशन सीरम आईपीए स्तर के साथ सहसंबंधित रहे आ लंबा उमिर के नियामक मार्ग (पी = 0.006) में समृद्ध रहे (चित्र 1 ए, तालिका 2, आ पूरक चित्र 1 सी)।
सीरम आईपीए स्तर, ग्लोबल ट्रांसक्रिप्ट, माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल ट्रांसक्रिप्ट, अवुरी मानव लिवर में डीएनए मिथाइलेशन के बीच संबंध के अंतर्निहित जैविक तंत्र के समझे खाती, हमनी के पिछला पथ विश्लेषण में पहचानल गईल जीन के ओवरलैप विश्लेषण कईनी (चित्र 1 ए)। 56 गो ओवरलैपिंग जीन सभ के पथ संवर्धन बिस्लेषण के परिणाम (चित्र 1A में करिया रेखा के अंदर) से पता चलल कि एपोप्टोसिस पथ (p = 0.00029) तीनों बिस्लेषण सभ में आम दू गो जीन सभ के उजागर कइलस: AKT1 आ YKT6 (YKT6 v-SNARE होमोलॉग), जइसे कि वेन आरेख (पूरक चित्र 2 आ चित्र 1A) में देखावल गइल बा। मजेदार बात इ बा कि हमनी के पाता चलल कि AKT1 (cg19831386) अवुरी YKT6 (cg24161647) के सीरम आईपीए के स्तर के संगे सकारात्मक संबंध बा (अतिरिक्त फाइल 3)। जीन उत्पाद के बीच संभावित प्रोटीन इंटरैक्शन के पहचान करे खातिर हमनी के इनपुट के रूप में 56 ओवरलैपिंग जीन में से सबसे जादा आम क्षेत्र स्कोर (0.900) वाला 13 जीन के चुननी अवुरी इंटरैक्शन मैप के निर्माण कईनी। विश्वास स्तर (सीमांत विश्वास) के अनुसार, सबसे अधिक स्कोर (0.900) वाला AKT1 जीन सबसे ऊपर रहे (चित्र 1 बी)।
पथ विश्लेषण के आधार प हमनी के पाता चलल कि एपोप्टोसिस प्रमुख मार्ग ह, एहसे हमनी के जांच कईनी कि का आईपीए के इलाज से इन विट्रो में एचएससी के एपोप्टोसिस प्रभावित होई। हमनी के पहिले ई देखवले रहनी जा कि आईपीए के अलग-अलग खुराक (10 μM, 100 μM, आ 1 mM) LX-2 कोशिका सभ खातिर गैर-विषाक्त रहे [15] । एह अध्ययन से पता चलल कि 10 μM आ 100 μM पर आईपीए उपचार से व्यवहार्य आ नेक्रोटिक कोशिका के संख्या बढ़ जाला। हालांकि, नियंत्रण समूह के तुलना में, कोशिका व्यवहार्यता 1 एमएम आईपीए एकाग्रता पर कम हो गईल, जबकि कोशिका परिगलन दर में कवनो बदलाव ना भईल (चित्र 2 ए, बी)। अगिला, एलएक्स-2 कोशिका में एपोप्टोसिस के प्रेरित करे खातिर इष्टतम एकाग्रता खोजे खातिर, हमनी के 24 घंटा (चित्र 2 ए-ई अवुरी पूरक चित्र 3 ए-बी) के लिए 10 माइक्रोन, 100 माइक्रोन, अवुरी 1 एमएम आईपीए के परीक्षण कईनी। मजेदार बात ई बा कि IPA 10 μM आ 100 μM से एपोप्टोसिस दर (%) में कमी आइल, हालाँकि, IPA 1 mM से नियंत्रण के तुलना में देर से एपोप्टोसिस आ एपोप्टोसिस दर (%) बढ़ गइल आ एह कारण एकरा के आगे के प्रयोग खातिर चुनल गइल (चित्र 2A–D)।
आईपीए एलएक्स-2 कोशिका के एपोप्टोसिस के प्रेरित करेला। फ्लो साइटोमेट्री द्वारा एपोप्टोटिक दर आ कोशिका आकृति विज्ञान के मात्रा निर्धारित करे खातिर एनेक्सिन वी आ 7-एएडी डबल स्टेनिंग विधि के इस्तेमाल कइल गइल। बीए कोशिका के 10 μM, 100 μM आ 1 mM IPA के साथ 24 घंटा तक या F–H TGF-β1 (5 ng/ml) आ 1 ​​mM IPA के साथ सीरम-मुक्त माध्यम में 24 घंटा तक इन्क्यूबेट कइल गइल। ए: जीवित कोशिका (एनेक्सिन वी -/ 7एएडी-) के बा; बी: नेक्रोटिक कोशिका (एनेक्सिन वी -/ 7एएडी +) के बा; सी, एफ: जल्दी (एनेक्सिन वी +/ 7एएडी-) के बा; डी, जी: देर से (एनेक्सिन वी + / 7एएडी। +); ई, एच: एपोप्टोटिक दर (%) में कुल शुरुआती आ देर से एपोप्टोटिक कोशिका के प्रतिशत। डेटा औसत ± एसडी, एन = 3 स्वतंत्र प्रयोग के रूप में व्यक्त कइल गइल बा। सांख्यिकीय तुलना बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के साथ एकतरफा एनोवा के उपयोग से कइल गइल। * पी < 0.05 के बा; ****पी < 0.0001 के बा
जइसे कि हमनी के पहिले देखवले बानी जा, 5 एनजी/एमएल TGF-β1 शास्त्रीय मार्कर जीन सभ के एक्सप्रेशन बढ़ा के एचएससी सक्रियण के पैदा क सके ला [15] । LX-2 कोशिकाओं के संयोजन में 5 एनजी / एमएल TGF-β1 और 1 एमएम आईपीए के साथ इलाज कइल गइल (चित्र 2 ई-एच)। TGF-β1 उपचार से एपोप्टोसिस दर में बदलाव ना भइल, हालाँकि, आईपीए सह-उपचार से TGF-β1 उपचार (चित्र 2E-H) के तुलना में देर से एपोप्टोसिस आ एपोप्टोसिस दर (%) बढ़ल। ई परिणाम बतावे लें कि 1 mM IPA TGF-β1 इंडक्शन से स्वतंत्र रूप से LX-2 कोशिका सभ में एपोप्टोसिस के बढ़ावा दे सके ला।
हमनी के आगे एलएक्स-2 कोशिका में माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन प आईपीए के प्रभाव के जांच कईनी। नतीजा में पाता चलल कि 1 एमएम आईपीए से ऑक्सीजन खपत दर (ओसीआर) पैरामीटर में कमी आईल: गैर-माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन, बेसल अवुरी अधिकतम श्वसन, प्रोटॉन लीक अवुरी एटीपी उत्पादन नियंत्रण समूह (चित्र 3 ए, बी) के मुक़ाबले, जबकि बायोएनर्जेटिक हेल्थ इंडेक्स (बीएचआई) में कवनो बदलाव ना भईल।
आईपीए एलएक्स-2 कोशिका में माइटोकॉन्ड्रिया के श्वसन के कम करेला। माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन वक्र (OCR) के माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन पैरामीटर (गैर-माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन, बेसल श्वसन, अधिकतम श्वसन, प्रोटॉन लीक, एटीपी जनरेशन, एसआरसी आ बीएचआई) के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा। कोशिका ए आ बी के क्रमशः 10 μM, 100 μM आ 1 mM आईपीए के साथ 24 घंटा तक इन्क्यूबेट कइल गइल। कोशिका सी आ डी के क्रमशः 24 घंटा ले सीरम-फ्री मीडियम में TGF-β1 (5 एनजी/एमएल) आ 1 ​​एमएम आईपीए के साथ इन्क्यूबेट कइल गइल। सभ माप के साइक्वांट किट के इस्तेमाल से डीएनए सामग्री के सामान्य बनावल गइल। बीएचआई: जैव ऊर्जावान स्वास्थ्य सूचकांक; एसआरसी: श्वसन रिजर्व क्षमता के बा; ओसीआर: ऑक्सीजन के खपत दर। डेटा औसत ± मानक विचलन (एसडी), n = 5 स्वतंत्र प्रयोग के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा। सांख्यिकीय तुलना एकतरफा एनोवा आ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के इस्तेमाल से कइल गइल। * पी < 0.05 के बा; **पी < 0.01 के बा; आ ***पी < 0.001 के बा
TGF-β1-सक्रिय LX-2 कोशिका के जैव ऊर्जावान प्रोफाइल पर आईपीए के प्रभाव के अधिक व्यापक समझ हासिल करे खातिर, हमनी के ओसीआर (चित्र 3 सी, डी) द्वारा माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीडेटिव फॉस्फोरिलेशन के विश्लेषण कइनी जा। नतीजा से पता चलल कि TGF-β1 उपचार नियंत्रण समूह (चित्र 3 सी, डी) के मुक़ाबले अधिकतम श्वसन, श्वसन रिजर्व क्षमता (एसआरसी) अवुरी बीएचआई के कम क सकता। एकरा अलावे, संयोजन उपचार से बेसल श्वसन, प्रोटॉन लीक अवुरी एटीपी उत्पादन में कमी आईल, लेकिन एसआरसी अवुरी बीएचआई TGF-β1 (चित्र 3 सी, डी) से इलाज करेवाला लोग के मुक़ाबले काफी जादे रहे।
हमनी के सीहॉर्स सॉफ्टवेयर (पूरक चित्र 4 ए-डी) द्वारा उपलब्ध करावल गइल “सेलुलर एनर्जी फेनोटाइप टेस्ट” भी कइनी जा। जइसे कि पूरक चित्र 3 बी में देखावल गइल बा, TGF-β1 उपचार के बाद ओसीआर आ ईसीएआर दुनों मेटाबोलिक क्षमता में कमी आइल, हालाँकि, नियंत्रण समूह के तुलना में संयोजन आ आईपीए उपचार समूह में कवनो अंतर ना देखल गइल। एकरा अलावे, नियंत्रण समूह (पूरक चित्र 4 सी) के मुक़ाबले संयोजन अवुरी आईपीए उपचार के बाद ओसीआर के बेसल अवुरी तनाव दुनो स्तर में कमी आईल। मजेदार बात ई बा कि संयोजन चिकित्सा के साथ भी अइसने पैटर्न देखल गइल, जहाँ TGF-β1 उपचार के तुलना में ईसीएआर के बेसल आ तनाव के स्तर में कवनो बदलाव ना देखल गइल (पूरक चित्र 4 सी)। एचएससी सभ में, माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीडेटिव फॉस्फोरिलेशन में कमी आ TGF-β1 उपचार के संपर्क में अइला के बाद SCR आ BHI के बहाल करे के संयोजन उपचार के क्षमता से मेटाबोलिक क्षमता (OCR आ ECAR) में बदलाव ना भइल। एकरा के मिला के देखल जाय तब ई परिणाम बतावे लें कि आईपीए एचएससी सभ में बायोएनर्जेटिक्स के कम क सके ला, ई बतावे ला कि आईपीए कम ऊर्जावान प्रोफाइल पैदा क सके ला जे एचएससी फेनोटाइप के निष्क्रियता के ओर शिफ्ट क सके ला (पूरक चित्र 4D)।
माइटोकॉन्ड्रिया गतिशीलता पर आईपीए के प्रभाव के जांच माइटोकॉन्ड्रिया आकृति विज्ञान आ नेटवर्क कनेक्शन के तीन आयामी मात्रा निर्धारण के साथे-साथे एमटीआर धुंधलापन (चित्र 4 आ पूरक चित्र 5) के इस्तेमाल से कइल गइल। चित्र 4 से पता चलेला कि, नियंत्रण समूह के तुलना में, TGF-β1 उपचार से औसत सतह क्षेत्रफल, शाखा संख्या, कुल शाखा लंबाई, अवुरी शाखा जंक्शन संख्या (चित्र 4 ए अवुरी बी) में कमी आईल अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया के अनुपात में गोलाकार से मध्यवर्ती आकृति विज्ञान में बदलाव भईल (चित्र 4C)। खाली आईपीए उपचार से औसत माइटोकॉन्ड्रिया आयतन में कमी आइल आ नियंत्रण समूह के तुलना में माइटोकॉन्ड्रिया के अनुपात गोलाकार से मध्यवर्ती आकृति विज्ञान में बदल गइल (चित्र 4 ए)। एकरे बिपरीत, माइटोकॉन्ड्रिया झिल्ली के संभावना पर निर्भर एमटीआर (चित्र 4 ए आ ई) द्वारा आकलन कइल गइल गोलाकारता, औसत शाखा लंबाई आ माइटोकॉन्ड्रिया गतिविधि में कवनो बदलाव ना भइल आ ई पैरामीटर समूह सभ के बीच अलग ना रहलें। एकरा के मिला के देखल जाय तब ई परिणाम बतावे लें कि TGF-β1 आ IPA उपचार जीवित LX-2 कोशिका सभ में माइटोकॉन्ड्रिया के आकार आ आकार के साथे-साथ नेटवर्क जटिलता के भी संतुलित करे वाला लउके ला।
आईपीए एलएक्स-2 कोशिका सभ में माइटोकॉन्ड्रिया डायनामिक्स आ माइटोकॉन्ड्रिया डीएनए के बहुतायत में बदलाव करे ला। ए सीरम-मुक्त माध्यम में TGF-β1 (5 एनजी / एमएल) आ 1 ​​एमएम आईपीए के साथ 24 घंटा तक इन्क्यूबेट जीवित LX-2 कोशिका के प्रतिनिधि कॉनफोकल छवि जवना में माइटोट्रैकर TM लाल CMXRos से रंगल माइटोकॉन्ड्रिया नेटवर्क आ DAPI से नीले रंग के नाभिक देखावल गइल बा। सभ डेटा में प्रति समूह कम से कम 15 छवि रहे। हमनी के हर नमूना प्रकार खातिर 10 जेड-स्टैक छवि हासिल कईनी। हर जेड-अक्ष अनुक्रम में 30 स्लाइस रहे, हर स्लाइस के मोटाई 9.86 माइक्रोन रहे। पैमाना बार: 10 माइक्रोन के बा। B. छवि पर अनुकूली थ्रेसहोल्डिंग लागू करके पहचानल गइल प्रतिनिधि वस्तु (केवल माइटोकॉन्ड्रिया)। हर समूह के सभ कोशिका खातिर मात्रात्मक विश्लेषण आ माइटोकॉन्ड्रिया आकृति विज्ञान नेटवर्क कनेक्शन के तुलना कइल गइल। सी. माइटोकॉन्ड्रिया के आकार अनुपात के आवृत्ति। 0 के करीब के मान गोलाकार आकृति के बतावे ला आ 1 के करीब के मान फिलामेंटस आकृति के बतावे ला। D माइटोकॉन्ड्रिया डीएनए (mtDNA) सामग्री के निर्धारण सामग्री आ विधि में वर्णित तरीका से कइल गइल। ई माइटोट्रैकर TM रेड सीएमएक्सआरओएस विश्लेषण फ्लो साइटोमेट्री (30,000 घटना) द्वारा कइल गइल जइसन कि सामग्री आ विधि में बतावल गइल बा। डेटा औसत ± एसडी, एन = 3 स्वतंत्र प्रयोग के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा। सांख्यिकीय तुलना एकतरफा एनोवा आ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के इस्तेमाल से कइल गइल। * पी < 0.05 के बा; **पी < 0.01 के बा; ***पी < 0.001 के बा; ****पी < 0.0001 के बा
एकरा बाद हमनी के माइटोकॉन्ड्रिया संख्या के संकेतक के रूप में LX-2 कोशिका में mtDNA सामग्री के विश्लेषण कईनी। नियंत्रण समूह के साथ तुलना में, TGF-β1-इलाज समूह (चित्र 4 डी) में mtDNA सामग्री बढ़ गईल। TGF-β1-इलाज समूह के तुलना में, संयोजन उपचार समूह (चित्र 4D) में mtDNA सामग्री में कमी आइल, ई बतावे ला कि आईपीए mtDNA सामग्री आ संभवतः माइटोकॉन्ड्रिया संख्या के साथे-साथ माइटोकॉन्ड्रिया के श्वसन (चित्र 3C) में भी कमी आ सके ला। एतने ना, आईपीए संयोजन उपचार में mtDNA सामग्री के कम करत लउकल लेकिन एमटीआर-मध्यस्थता वाला माइटोकॉन्ड्रिया गतिविधि के प्रभावित ना कईलस (चित्र 4A-C)।
हमनी के एलएक्स-2 कोशिका (चित्र 5 ए-डी) में फाइब्रोसिस, एपोप्टोसिस, जीवित रहे, अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया गतिशीलता से जुड़ल जीन के mRNA स्तर के संगे आईपीए के संबंध के जांच कईनी। नियंत्रण समूह के तुलना में, TGF-β1 से इलाज करे वाला समूह में कोलेजन टाइप I α2 चेन (COL1A2), α-स्मूद मसल एक्टिन (αSMA), मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 2 (MMP2), मेटालोप्रोटीनेज 1 (TIMP1) के टिश्यू इनहिबिटर, अवुरी डायनामिन 1 निहन जीन (DRP1) जईसन जीन के अभिव्यक्ति में बढ़ोतरी देखाई देलस फाइब्रोसिस आ सक्रियण होला। एकरे अलावा, नियंत्रण समूह के तुलना में, TGF-β1 उपचार से न्यूक्लियर प्रेग्नेन एक्स रिसेप्टर (PXR), कैस्पेस 8 (CASP8), MAPKAPK3, बी-सेल α के अवरोधक, न्यूक्लियर फैक्टर κ जीन लाइट पेप्टाइड (NFκB1A) के बढ़ावे वाला, आ न्यूक्लियर फैक्टर κB किनेज सबयूनिट β (IKBKB) के अवरोधक के mRNA स्तर में कमी आइल (चित्र 5A-D)। TGF-β1 उपचार के तुलना में, TGF-β1 आ IPA के संयोजन उपचार से COL1A2 आ MMP2 के एक्सप्रेशन में कमी आइल, बाकी PXR, TIMP1, बी-सेल लिम्फोमा-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, आ IKBKB के mRNA लेवल बढ़ गइल। आईपीए के इलाज से MMP2, Bcl-2-एसोसिएटेड प्रोटीन एक्स (BAX), AKT1, ऑप्टिक एट्रोफी प्रोटीन 1 (OPA1), आ माइटोकॉन्ड्रिया फ्यूजन प्रोटीन 2 (MFN2) के एक्सप्रेशन में काफी कमी आइल, जबकि नियंत्रण समूह के तुलना में CASP8, NFκB1A, NFκB1B, आ IKBKB के एक्सप्रेशन में बढ़ती भइल। हालाँकि, कैस्पेस-3 (CASP3), एपोप्टोटिक पेप्टाइडेज एक्टिवेटिंग फैक्टर 1 (APAF1), माइटोकॉन्ड्रिया फ्यूजन प्रोटीन 1 (MFN1), आ फिशन प्रोटीन 1 (FIS1) के एक्सप्रेशन में कौनों अंतर ना पावल गइल। सामूहिक रूप से ई परिणाम बतावे लें कि आईपीए उपचार फाइब्रोसिस, एपोप्टोसिस, जीवित रहे आ माइटोकॉन्ड्रिया डायनामिक्स से जुड़ल जीन सभ के एक्सप्रेशन के मॉड्यूलेट करे ला। हमनी के डेटा बतावेला कि आईपीए के इलाज से एलएक्स-2 कोशिका में फाइब्रोसिस में कमी आवेला; एकरे साथ ही ई फेनोटाइप के निष्क्रियता के ओर शिफ्ट क के जीवित रहे के उत्तेजित करे ला।
आईपीए एलएक्स-2 कोशिका सभ में फाइब्रोब्लास्ट, एपोप्टोटिक, व्यवहार्यता, आ माइटोकॉन्ड्रिया डायनामिक्स जीन सभ के एक्सप्रेशन के मॉड्यूलेट करे ला। हिस्टोग्राम सभ में सीरम-फ्री मीडियम में 24 घंटा ले LX-2 कोशिका सभ के TGF-β1 आ IPA के साथ प्रेरित कइला के बाद अंतर्जात नियंत्रण (RPLP0 या PPIA) के सापेक्ष mRNA अभिव्यक्ति के देखावल जाला। ए फाइब्रोब्लास्ट के संकेत देला, बी एपोप्टोटिक कोशिका के संकेत देला, सी जीवित कोशिका के संकेत देला आ डी माइटोकॉन्ड्रिया डायनामिक्स जीन एक्सप्रेशन के संकेत देला। डेटा औसत ± मानक विचलन (एसडी), n = 3 स्वतंत्र प्रयोग के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा। सांख्यिकीय तुलना एकतरफा एनोवा आ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के इस्तेमाल से कइल गइल। * पी < 0.05 के बा; **पी < 0.01 के बा; ***पी < 0.001 के बा; ****पी < 0.0001 के बा
फिर, कोशिका आकार (FSC-H) आ साइटोप्लाज्मिक जटिलता (SSC-H) में बदलाव के आकलन फ्लो साइटोमेट्री (चित्र 6A, B) द्वारा कइल गइल, आ IPA उपचार के बाद कोशिका आकृति बिज्ञान में बदलाव के आकलन ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (TEM) आ फेज कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी (पूरक चित्र 6A-B) द्वारा कइल गइल। जइसन कि उम्मीद रहे, TGF-β1-इलाज समूह में कोशिका नियंत्रण समूह (चित्र 6 ए, बी) के तुलना में आकार में बढ़ गईल, जवन कि रफ एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर *) अवुरी फेगोलाइसोसोम (पी) के क्लासिक विस्तार देखावत बा, जवन कि हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) सक्रियण के संकेत करता (पूरक चित्र 6 ए)। हालांकि, TGF-β1-इलाज समूह के साथ तुलना में, कोशिका के आकार, साइटोप्लाज्मिक जटिलता (चित्र 6 ए, बी), अवुरी ईआर * सामग्री में TGF-β1 अवुरी आईपीए संयोजन उपचार समूह (पूरक चित्र 6 ए) में कमी आईल। एकरा अलावे, आईपीए उपचार से नियंत्रण समूह के तुलना में कोशिका के आकार, साइटोप्लाज्मिक जटिलता (चित्र 6 ए, बी), पी अवुरी ईआर * सामग्री (पूरक चित्र 6 ए) में कमी आईल। एकरा अलावा, एपोप्टोटिक कोशिका के सामग्री नियंत्रण समूह (सफेद तीर, पूरक चित्र 6 बी) के तुलना में आईपीए उपचार के 24 घंटा के बाद बढ़ गईल। सामूहिक रूप से, ई परिणाम बतावे लें कि 1 mM IPA HSC एपोप्टोसिस के उत्तेजित क सके ला आ TGF-β1 द्वारा पैदा होखे वाला कोशिका आकृति बिज्ञान के पैरामीटर सभ में बदलाव के उलट सके ला, जेकरा से कोशिका के आकार आ जटिलता के नियंत्रित कइल जा सके ला, जवन एचएससी निष्क्रियता से जुड़ल हो सके ला।
आईपीए एलएक्स-2 कोशिका सभ में कोशिका के आकार आ साइटोप्लाज्मिक जटिलता में बदलाव करे ला। फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण के प्रतिनिधि छवियाँ। एह बिस्लेषण में एलएक्स-2 कोशिका सभ खातिर बिसेस गेटिंग रणनीति के इस्तेमाल कइल गइल: कोशिका के आबादी के परिभाषित करे खातिर एसएससी-ए/एफएससी-ए, डबलट सभ के पहिचान करे खातिर एफएससी-एच/एफएससी-ए, आ कोशिका के आकार आ जटिलता बिस्लेषण खातिर एसएससी-एच/एफएससी-एच। कोशिका सभ के सीरम-मुक्त माध्यम में TGF-β1 (5 एनजी/एमएल) आ 1 ​​एमएम आईपीए के साथ 24 घंटा ले इन्क्यूबेट कइल गइल। LX-2 कोशिका सभ के कोशिका के आकार आ साइटोप्लाज्मिक जटिलता बिस्लेषण खातिर निचला बाईं क्वाड्रंट (SSC-H-/FSC-H-), ऊपरी बाईं क्वाड्रंट (SSC-H +/FSC-H-), निचला दाहिना क्वाड्रंट (SSC-H-/FSC-H +), आ ऊपरी दाहिना क्वाड्रंट (SSC-H +/FSC-H +) में बाँटल गइल। बी कोशिका आकृति विज्ञान के विश्लेषण फ्लो साइटोमेट्री द्वारा FSC-H (अग्र बिखरल, कोशिका आकार) आ SSC-H (साइड बिखरल, साइटोप्लाज्मिक जटिलता) (30,000 घटना) के उपयोग से कइल गइल। डेटा औसत ± एसडी, एन = 3 स्वतंत्र प्रयोग के रूप में प्रस्तुत कइल गइल बा। सांख्यिकीय तुलना एकतरफा एनोवा आ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट के इस्तेमाल से कइल गइल। * पी < 0.05 के बा; **पी < 0.01 के बा; ***पी <0.001 आ ****पी <0.0001 के बा
आईपीए नियर आंत के मेटाबोलाइट्स रिसर्च के एगो गरम बिसय बन गइल बा, जेकरा से पता चले ला कि आंत के माइक्रोबायोटा में नया लक्ष्य के खोज हो सके ला। एह से ई दिलचस्प बा कि आईपीए, एगो मेटाबोलाइट जेकरा के हमनी के मनुष्य में लिवर फाइब्रोसिस से जोड़ले बानी जा [15] , जानवरन के मॉडल में संभावित एंटी-फाइब्रोटिक यौगिक बतावल गइल बा [13, 14]। इहाँ, हमनी के पहिला बेर टाइप 2 डायबिटीज (T2D) के बिना मोटापा से पीड़ित लोग में सीरम आईपीए अवुरी ग्लोबल लिवर ट्रांसक्रिप्टोमिक्स अवुरी डीएनए मिथाइलेशन के बीच संबंध के प्रदर्शन करतानी, जवना में एपोप्टोसिस, माइटोफेजी अवुरी लंबा उम्र के संगे-संगे लिवर होमियोस्टेसिस के नियंत्रित करेवाला संभावित उम्मीदवार जीन AKT1 के भी उजागर कईल गईल बा। हमनी के अध्ययन के एगो अवुरी नवीनता इ बा कि हमनी के एलएक्स-2 कोशिका में एपोप्टोसिस, कोशिका आकृति विज्ञान, माइटोकॉन्ड्रिया बायोएनर्जेटिक्स अवुरी गतिशीलता के संगे आईपीए उपचार के बातचीत के प्रदर्शन कईनी, जवन कि कम ऊर्जा स्पेक्ट्रम के संकेत देता जवन कि एचएससी फेनोटाइप के निष्क्रियता के ओर शिफ्ट करेला, जवना से आईपीए लिवर फाइब्रोसिस में सुधार खाती एगो संभावित उम्मीदवार बन गईल।
हमनी के पाता चलल कि एपोप्टोसिस, माइटोफेजी अवुरी लंबा उम्र सबसे महत्वपूर्ण कैनोनिकल रास्ता रहे जवन कि सर्कुलेशन सीरम आईपीए से जुड़ल लिवर जीन से समृद्ध रहे। माइटोकॉन्ड्रिया क्वालिटी कंट्रोल (MQC) सिस्टम में बिघटन से माइटोकॉन्ड्रिया के बिकार, माइटोफेजी आ एपोप्टोसिस हो सके ला, जेकरा से MASLD के होखे के बढ़ावा मिले ला [33, 34]। एह से हमनी के अनुमान लगावल जा सके ला कि आईपीए एपोप्टोसिस, माइटोफेजी आ लिवर में लंबा उमिर के माध्यम से कोशिका गतिशीलता आ माइटोकॉन्ड्रिया के अखंडता के बनावे रखे में शामिल हो सके ला। हमनी के आंकड़ा से पता चलल कि तीनों परख में दुगो जीन आम रहे: YKT6 अवुरी AKT1। इहाँ इहो बतावल जरूरी बा कि YKT6 एगो SNARE प्रोटीन हवे जे कोशिका झिल्ली के संलयन के प्रक्रिया में शामिल होला। ई ऑटोफेगोसोम पर STX17 आ SNAP29 के साथ इनिशिएशन कॉम्प्लेक्स बना के ऑटोफेजी आ माइटोफेजी में भूमिका निभावे ला, जेकरा से ऑटोफेगोसोम आ लाइसोसोम सभ के फ्यूजन के बढ़ावा मिले ला[35]। एकरे अलावा, YKT6 के कामकाज के नुकसान के परिणामस्वरूप माइटोफेजी बिगड़ जाला [36] जबकि YKT6 के अपरेग्यूलेशन हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा (HCC) के बढ़ती से जुड़ल होला, कोशिका के जीवित रहे में बढ़ती देखे के मिले ला[37]। दूसर ओर, AKT1 सभसे महत्व के परस्पर क्रिया करे वाला जीन हवे आ लिवर के बेमारी सभ में महत्वपूर्ण भूमिका निभावे ला, जवना में PI3K/AKT सिग्नलिंग पथ, कोशिका चक्र, कोशिका के प्रवासन, प्रसार, फोकल आसंजन, माइटोकॉन्ड्रिया के कामकाज आ कोलेजन के स्राव सामिल बाड़ें [38–40]। सक्रिय PI3K/AKT सिग्नलिंग पथ हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSC) सभ के सक्रिय क सके ला, ई कोशिका सभ होलीं जे एक्स्ट्रासेलुलर मैट्रिक्स (ECM) के निर्माण खातिर जिम्मेदार होलीं आ एकर डिसरेगुलेशन लिवर फाइब्रोसिस के होखे आ बढ़ती में योगदान दे सके ला[40]। एकरे अलावा, AKT कोशिका जीवित रहे के प्रमुख कारक सभ में से एक हवे जे p53-निर्भर कोशिका एपोप्टोसिस के रोके ला आ AKT सक्रियण लिवर कोशिका एपोप्टोसिस के रोकथाम से जुड़ल हो सके ला [41, 42]। प्राप्त परिणाम बतावे ला कि आईपीए एपोप्टोसिस में प्रवेश भा जीवित रहे के बीच हेपेटोसाइट्स के निर्णय के प्रभावित क के लिवर माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़ल एपोप्टोसिस में शामिल हो सके ला। एह परभाव सभ के नियंत्रण एकेटी आ/या वाईकेटी6 कैंडिडेट जीन सभ द्वारा हो सके ला, ई लिवर होमियोस्टेसिस खातिर बहुत महत्व के होलें।
हमनी के नतीजा से पता चलल कि 1 एमएम आईपीए TGF-β1 उपचार से स्वतंत्र LX-2 कोशिका में एपोप्टोसिस पैदा कईलस अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन में कमी आईल। ई धियान देवे लायक बा कि एपोप्टोसिस फाइब्रोसिस रिजोल्यूशन आ हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSC) सक्रियण खातिर एगो प्रमुख रास्ता हवे, आ लिवर फाइब्रोसिस के रिवर्सिबल फिजियोलॉजिकल रिस्पांस में भी एगो प्रमुख घटना हवे [4, 43]। एतने ना, संयोजन उपचार के बाद एलएक्स-2 कोशिका में बीएचआई के बहाली से माइटोकॉन्ड्रिया बायोएनर्जेटिक्स के नियमन में आईपीए के संभावित भूमिका के बारे में नाया जानकारी मिलल। आराम आ निष्क्रिय स्थिति में, हेमेटोपोइएटिक कोशिका सभ आमतौर पर एटीपी पैदा करे खातिर माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीडेटिव फॉस्फोरिलेशन के इस्तेमाल करे लीं आ मेटाबोलिक एक्टिविटी कम होले। दूसर ओर, एचएससी सक्रियण माइटोकॉन्ड्रिया के श्वसन आ जैवसंश्लेषण के बढ़ावे ला ताकि ग्लाइकोलाइटिक अवस्था में प्रवेश करे के ऊर्जा के मांग के भरपाई हो सके [44] । आईपीए के मेटाबोलिक पोटेंशियल आ ईसीएआर पर कवनो असर ना पड़े से पता चलेला कि ग्लाइकोलाइटिक मार्ग के कम प्राथमिकता दिहल गइल बा. एही तरे एगो अउरी अध्ययन से पता चलल कि 1 mM IPA कार्डियोमायोसाइट्स, ह्यूमन हेपेटोसाइट सेल लाइन (Huh7) आ ह्यूमन नाभि नस एंडोथेलियल सेल (HUVEC) में माइटोकॉन्ड्रिया रेस्पिरेटरी चेन एक्टिविटी के मॉड्यूलेट करे में सक्षम रहल; हालाँकि, कार्डियोमायोसाइट्स में ग्लाइकोलाइसिस पर आईपीए के कौनों परभाव ना पावल गइल, ई बतावे ला कि आईपीए अन्य कोशिका प्रकार सभ के बायोएनर्जेटिक्स के प्रभावित क सकत बा [45] । एह से हमनी के अनुमान बा कि 1 mM IPA हल्का रासायनिक अनकपलर के रूप में काम क सके ला, काहें से कि ई mtDNA के मात्रा में बदलाव कइले बिना फाइब्रोजेनिक जीन एक्सप्रेशन, कोशिका आकृति बिज्ञान आ माइटोकॉन्ड्रिया बायोएनर्जेटिक्स के काफी कम क सके ला [46] । माइटोकॉन्ड्रिया अनकपलर सभ संस्कृति से पैदा होखे वाला फाइब्रोसिस आ एचएससी सक्रियण के रोक सके लें [47] आ कुछ खास प्रोटीन सभ जइसे कि अनकपलिंग प्रोटीन (UCP) भा एडेनिन न्यूक्लियोटाइड ट्रांसलोकेज (ANT) द्वारा नियंत्रित भा प्रेरित माइटोकॉन्ड्रिया एटीपी उत्पादन के कम क सके लें। कोशिका के प्रकार के आधार पर ई घटना कोशिका सभ के एपोप्टोसिस से बचा सके ले आ/या एपोप्टोसिस के बढ़ावा दे सके ले [46] । हालाँकि, हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल निष्क्रियता में माइटोकॉन्ड्रिया अनकपलर के रूप में आईपीए के भूमिका के स्पष्ट करे खातिर अउरी अध्ययन के जरूरत बा।
एकरा बाद हमनी के जांच कईनी कि का माइटोकॉन्ड्रिया श्वसन में बदलाव जीवित एलएक्स-2 कोशिका में माइटोकॉन्ड्रिया आकृति विज्ञान में झलकत बा। मजेदार बात ई बा कि TGF-β1 के इलाज से माइटोकॉन्ड्रिया के अनुपात में गोलाकार से बिचालीन में बदलाव होला, माइटोकॉन्ड्रिया के शाखा में कमी आ माइटोकॉन्ड्रिया के बिखंडन में प्रमुख कारक DRP1 के एक्सप्रेशन बढ़े ला [48] । एकरे अलावा, माइटोकॉन्ड्रिया के बिखंडन समग्र नेटवर्क जटिलता से जुड़ल होला आ फ्यूजन से बिखंडन में संक्रमण हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSC) सक्रियण खातिर बहुत महत्व के होला जबकि माइटोकॉन्ड्रिया के बिखंडन के रोकथाम से एचएससी एपोप्टोसिस होला [49] । एह तरह से, हमनी के नतीजा बतावेला कि TGF-β1 उपचार शाखा में कमी के संगे माइटोकॉन्ड्रिया नेटवर्क जटिलता में कमी के प्रेरित क सकता, जवन कि सक्रिय हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSCs) से जुड़ल माइटोकॉन्ड्रिया विखंडन में जादे आम बा। एकरा अलावे हमनी के आंकड़ा से पता चलल कि आईपीए माइटोकॉन्ड्रिया के अनुपात के गोलाकार से मध्यवर्ती आकार में बदल सकता, जवना से ओपीए1 अवुरी एमएफएन2 के अभिव्यक्ति में कमी आ सकता। अध्ययन सभ से पता चलल बा कि OPA1 के डाउनरेगुलेशन से माइटोकॉन्ड्रिया झिल्ली के क्षमता में कमी हो सके ला आ कोशिका एपोप्टोसिस के ट्रिगर हो सके ला [50] । MFN2 के माइटोकॉन्ड्रिया फ्यूजन आ एपोप्टोसिस के मध्यस्थता करे खातिर जानल जाला[51]। प्राप्त परिणाम बतावे ला कि TGF-β1 आ/या IPA द्वारा LX-2 कोशिका सभ के इंडक्शन माइटोकॉन्ड्रिया के आकार आ आकार के साथे-साथ सक्रियण के स्थिति आ नेटवर्क जटिलता के भी मॉड्यूलेट करे वाला लउके ला।
हमनी के नतीजा बतावता कि TGFβ-1 अवुरी IPA के संयोजन उपचार एपोप्टोसिस से चकमा देवे वाली कोशिका में फाइब्रोसिस, एपोप्टोसिस अवुरी जीवित रहे से जुड़ल जीन के mRNA अभिव्यक्ति के नियंत्रित क के mtDNA अवुरी कोशिका आकृति विज्ञान के पैरामीटर के कम क सकता। दरअसल, आईपीए AKT1 आ महत्वपूर्ण फाइब्रोसिस जीन जइसे कि COL1A2 आ MMP2 के mRNA एक्सप्रेशन लेवल में कमी कइलस, बाकी CASP8 के एक्सप्रेशन लेवल में बढ़ती कइलस, जवन एपोप्टोसिस से जुड़ल बा। हमनी के नतीजा से पता चलल कि आईपीए के इलाज के बाद बीएएक्स एक्सप्रेशन में कमी आईल अवुरी टीआईएमपी1 परिवार के सबयूनिट, बीसीएल-2 अवुरी एनएफ-कबी के mRNA एक्सप्रेशन बढ़ गईल, जवना से लागता कि आईपीए हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) में जीवित रहे के संकेत के उत्तेजित क सकता, जवन कि एपोप्टोसिस से बचेला। ई अणु सक्रिय हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल सभ में प्रो-सर्वाइवल सिग्नल के रूप में काम क सकत बाड़ें, ई एंटी-एपोप्टोटिक प्रोटीन सभ (जइसे कि Bcl-2) के एक्सप्रेशन में बढ़ती, प्रो-एपोप्टोटिक BAX के एक्सप्रेशन में कमी आ TIMP आ NF-κB के बीच के जटिल इंटरप्ले से जुड़ल हो सके लें [5, 7]। आईपीए पीएक्सआर के माध्यम से आपन प्रभाव देखावेला, अवुरी हमनी के पाता चलल कि टीजीएफ-बीटा 1 अवुरी आईपीए के संगे संयोजन उपचार से पीएक्सआर mRNA अभिव्यक्ति के स्तर बढ़ गईल, जवन कि एचएससी सक्रियण के दमन के संकेत देवेला। सक्रिय पीएक्सआर सिग्नलिंग के इन विवो आ इन विट्रो दुनों तरीका से एचएससी सक्रियण के रोके खातिर जानल जाला [52, 53]। हमनी के नतीजा बतावेला कि आईपीए एपोप्टोसिस के बढ़ावा देके, फाइब्रोसिस अवुरी माइटोकॉन्ड्रिया मेटाबोलिज्म के कम क के, अवुरी जीवित रहे के संकेत के बढ़ा के सक्रिय एचएससी के निकासी में भाग ले सकता, जवन कि सक्रिय एचएससी फेनोटाइप के निष्क्रिय में बदल देवे वाली ठेठ प्रक्रिया ह। एपोप्टोसिस में आईपीए के संभावित तंत्र आ भूमिका के एगो अउरी संभावित सफाई ई बा कि ई मुख्य रूप से माइटोफेजी (इंट्रिंसिक पथ) आ एक्सट्रिंसिक टीएनएफ सिग्नलिंग पथ (तालिका 1) के माध्यम से बेकाम माइटोकॉन्ड्रिया के स्केवेंज करे ला, जवन सीधे NF-κB सरवाइवल सिग्नलिंग पथ से जुड़ल होला (पूरक चित्र 7)। मजेदार बात ई बा कि आईपीए से संबंधित समृद्ध जीन एपोप्टोटिक पथ में प्रो-एपोप्टोटिक आ प्रो-सर्वाइवल सिग्नल पैदा करे में सक्षम होलें [54] , ई बतावे ला कि आईपीए एह जीन सभ के साथ बातचीत क के एपोप्टोटिक रास्ता भा जीवित रहे के पैदा क सके ला। हालाँकि, एचएससी सक्रियण के दौरान आईपीए एपोप्टोसिस भा जीवित रहे के कइसे पैदा करे ला आ एकर यंत्रवत् रास्ता सभ के बारे में ई साफ नइखे।
आईपीए एगो माइक्रोबियल मेटाबोलाइट हवे जे आंत के माइक्रोबायोटा के माध्यम से आहार में ट्रिप्टोफैन से बनल होला। अध्ययन से पता चलल बा कि एकर आंत के वातावरण में एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटीऑक्सीडेंट आ एपिजेनेटिक रेगुलेटरी गुण होला।[55] अध्ययन सभ से पता चलल बा कि आईपीए आंत के बाधा के कामकाज के संतुलित क सके ला आ ऑक्सीडेटिव तनाव के कम क सके ला, जे एकरे स्थानीय शारीरिक परभाव में योगदान दे सके ला।[56] दरअसल, आईपीए के संचार के माध्यम से लक्ष्य अंग सभ में पहुँचावल जाला आ चूंकि आईपीए ट्रिप्टोफैन, सेरोटोनिन आ इंडोल डेरिवेटिव सभ के साथ समान प्रमुख मेटाबोलाइट संरचना साझा करे ला, आईपीए मेटाबोलिक क्रिया करे ला जेकरा परिणामस्वरूप प्रतिस्पर्धी मेटाबोलिक भाग्य होला।[52] आईपीए एंजाइम भा रिसेप्टर सभ पर बाइंडिंग साइट खातिर ट्रिप्टोफैन से निकलल मेटाबोलाइट्स के साथ प्रतिस्पर्धा क सके ला, संभावित रूप से सामान्य मेटाबोलिक रास्ता सभ के बिघटन क सके ला। ई एकरे चिकित्सीय विंडो के बेहतर तरीका से समझे खातिर एकरे फार्माकोकाइनेटिक्स आ फार्माकोडायनामिक्स पर अउरी अध्ययन के जरूरत के रेखांकित करे ला।[57] देखे के बा कि ई हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSC) में भी हो सकेला कि ना।
हम मानत बानी कि हमनी के पढ़ाई में कुछ सीमा बा. आईपीए से जुड़ल संघ के विशेष रूप से जांच करे खातिर हमनी के टाइप 2 डायबिटीज मेलिटस (T2DM) के मरीज के बाहर क देनी। हमनी के मानत बानी जा कि एहसे हमनी के निष्कर्ष के व्यापक प्रयोज्यता टाइप 2 डायबिटीज मेलिटस अवुरी एडवांस लिवर रोग के मरीज प सीमित हो जाला। हालाँकि, मानव सीरम में आईपीए के शारीरिक एकाग्रता 1–10 μM होला [11, 20], 1 mM IPA के एकाग्रता के सभसे ढेर गैर-विषाक्त एकाग्रता [15] आ एपोप्टोसिस के सभसे ढेर दर के आधार पर चुनल गइल, नेक्रोटिक कोशिका के आबादी के प्रतिशत में कौनों अंतर ना रहल। हालाँकि, एह अध्ययन में आईपीए के सुप्राफिजियोलॉजिकल लेवल के इस्तेमाल कइल गइल, वर्तमान में आईपीए के कारगर खुराक के बारे में कौनों आम सहमति नइखे [52] । हालांकि हमनी के नतीजा महत्वपूर्ण बा, लेकिन आईपीए के व्यापक मेटाबोलिक भाग्य शोध के सक्रिय क्षेत्र बनल बा। एतने ना, सीरम आईपीए के स्तर अवुरी लिवर ट्रांसक्रिप्ट के डीएनए मिथाइलेशन के बीच संबंध प हमनी के निष्कर्ष ना सिर्फ हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) से मिलल बालुक लिवर के ऊतक से भी मिलल। हमनी के ट्रांसक्रिप्टोम विश्लेषण से मिलल पिछला निष्कर्ष के आधार पर मानव LX-2 कोशिका के इस्तेमाल करे के चुननी जा कि आईपीए हेमेटोपोइएटिक स्टेम सेल (HSC) सक्रियण से जुड़ल बा [15] , आ एचएससी लिवर फाइब्रोसिस के प्रगति में शामिल प्रमुख कोशिका हवें। लिवर कई प्रकार के कोशिका सभ से बनल होला, एह से अन्य कोशिका मॉडल सभ जइसे कि हेपेटोसाइट-एचएससी-इम्यून सेल को-कल्चर सिस्टम सभ पर कैस्पेस सक्रियण आ डीएनए बिखंडन के साथ मिल के प्रोटीन लेवल सहित क्रिया के तंत्र पर बिचार कइल जाय ताकि आईपीए के भूमिका आ अन्य लिवर कोशिका प्रकार सभ के साथ एकरे परस्पर क्रिया के अध्ययन कइल जा सके।